冷阳 ^1,3 , 刘世会 ^1,3* , 赵懿琛 ^2,3* , 赵德刚 ^3,4

1 贵州大学药学院, 贵阳, 550025; 2 贵州大学茶学院, 贵阳, 550025; 3 贵州大学, 山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室, 贵阳, 550025; 4 贵州省农业科学研究院, 国家农业农村部 DUS 中心贵阳分中心, 贵阳, 550006
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 16 篇   
收稿日期: 2019年04月09日    接受日期: 2019年04月10日    发表日期: 2020年05月28日

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本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides) EuGT2 基因为基础，利用基因重组技术构建原核表达载体 pMCSG19-EuGT2。重组载体转化到 E. coli Rosetta (DE3)中，用 0.05 mmol/L 异丙基 β-D- 硫代半乳糖苷(IPTG)在 37℃下诱导 6 h。使用镍 - 亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化，并用 15%十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。研究结果表明，杜仲 EuGT2 基因在 E. coli Rosetta (DE3)中得到成功表达，重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白。经 SDS-PAGE 凝胶电泳检测，在相对分子质量约 56 kD 处有 1 条特异性蛋白条带，经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲 EuGT2 蛋白。以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据。
 

杜仲(Eucommia ulmoides)；糖基转移酶；原核表达；蛋白纯化